Perbezaan Antara Kloning dan Subcloning

Perbezaan Utama - Cloning vs Subcloning
 

Pengklonan dan Subcloning adalah prosedur biologi molekul yang mencipta sel atau genetik identik genetik yang mengandungi DNA atau gen yang menarik. Pengklonan adalah teknik yang melibatkan pemasukan gen yang berminat atau DNA ke dalam vektor, replikasinya dalam bakteria host, dan pengeluaran sel atau organisma yang merupakan salinan tepat dari solek genetik. Subcloning adalah teknik yang melibatkan pemasukan gen yang menarik, yang telah dimasukkan ke dalam vektor, ke dalam vektor sekunder, replikasi dalam bakteria host, dan pengeluaran salinan genetik yang sama secara genetik atau organisma. Perbezaan utama antara kloning dan subcloning ialah, dalam pengklonan, gen yang menarik, sekali diligalkan ke dalam vektor, meneruskan proses pengklonan sementara, dalam subcloning, gen yang sudah diklonkan kepentingan dipisahkan dari vektor induk dan dimasukkan kembali ke vektor penerima dan meneruskan proses.

KANDUNGAN
1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama
2. Apa itu Cloning
3. Apa itu Subcloning
4. Side by Side Comparison - Cloning vs Subcloning
5. Ringkasan

Apa itu Cloning?

Pengklonan adalah prosedur yang menghasilkan organisma atau sel yang sama secara genetik. Secara semulajadi, pengklonan berlaku dalam cara pembiakan aseksual. Apabila tiada penggabungan atau pengubahan genetik, sel-sel anak perempuan menerima solek genetik yang sama dari ibu bapa. Organisme prokariotik dan eukariotik membuat klon oleh pembelahan binary, budding, mitosis, dan lain-lain. Dalam biologi molekular, gen pengklonan atau serpihan tertentu DNA adalah kaedah popular untuk mengkaji struktur dan fungsi seksyen DNA tertentu itu.

Tujuan utama pengklonan molekul adalah membuat jutaan salinan sel atau organisme genetik yang identik dengan fragmen DNA yang menarik (terutama gen). Ia mewujudkan organisma dengan salinan genetik tepat yang lain. Terutamanya, gen tertentu diklonkan dalam kajian molekular untuk mendapatkan maklumat struktur dan fungsi dan untuk penjujukan DNA. Juga, untuk pengeluaran protein tertentu atau produk dalam skala besar, kloning digunakan secara meluas.

Prosedur Pengklonan

Langkah asas prosedur kloning adalah seperti berikut.

1. Pengenalpastian dan pengasingan gen yang menarik. (Pengukuhan gen faedah oleh PCR).
2. Sekatan pencernaan gen minat (Endonuclease sekatan memotong gen).
3. Penghadaman sekatan DNA vektor. (DNA vektor juga dipotong menggunakan endonuclease sekatan yang sama).
4. Memasukkan gen ke dalam vektor dan pembentukan molekul rekombinan.
5. Transformasi vektor rekombinan ke dalam bakteria tuan rumah.
6. Pengasingan dan pengenalpastian bakteria yang berubah (vektor plasmid harus mengandungi gen yang dipilih, yang paling biasa adalah gen rintangan antibiotik untuk menyaring bakteria yang berubah).
7. Ekspresi gen rekombinan dalam tuan rumah.

Rajah_01: Prosedur Pengklonan

Apa itu Subcloning?

Subcloning adalah prosedur untuk menggerakkan gen yang menarik dari satu vektor ke vektor lain untuk melihat ekspresi gen untuk mendapatkan fungsi yang diinginkan dari gen tersebut. Dalam kaedah ini, dua vektor terlibat; iaitu vektor induk dan vektor destinasi. Selitan klon dipindahkan semula ke dalam vektor kedua dalam subcloning. Objektif pemindahan gen dari vektor pertama ke vektor kedua adalah untuk mendapatkan sesuatu yang tidak dapat dilakukan oleh vektor pertama atau untuk memisahkan gen lagi dalam fragmen DNA yang diklonkan dan menyatakannya sendiri. Enzim sekatan digunakan dalam prosedur ini pada mulanya.

Prosedur Subcloning

Langkah-langkah asas subcloning adalah seperti berikut.

1. Dengan bantuan endonucleases sekatan, pemisahan DNA kepentingan dalam plasmid penderma (vektor induk).
2. Pengukuhan DNA minat menggunakan PCR.
3. Pembersihan produk PCR (DNA faedah) oleh elektroforesis gel.
4. Pembukaan plasmid penerima oleh endonucleases sekatan yang sama digunakan untuk memisahkan DNA kepentingan dalam plasmid ibu bapa.
5. Ligation DNA kepentingan (gen) ke plasmid penerima untuk membuat plasmid subcloned.
6. Transformasi vektor subcloned menjadi bakteria hos yang berwibawa.
7. Pemeriksaan sel berubah.
8. Penyucian DNA plasmid dan penggunaan untuk penjujukan DNA atau ekspresi gen untuk mendapatkan produk yang diinginkan.

Subcloning dijalankan pada masa-masa mengasingkan satu gen dari kumpulan klon gen atau apabila gen minat diperlukan untuk dipindahkan ke plasmid yang berguna untuk melihat fungsi sebenar gen minat.

Rajah_02: Prosedur Subcloning

Apakah perbezaan antara Cloning dan Subcloning?

Cloning vs Subcloning
Pengklonan adalah prosedur yang menghasilkan organisma atau sel yang sama secara genetik.	Subcloning adalah prosedur untuk menggerakkan gen yang menarik dari satu vektor ke vektor yang lain untuk melihat ekspresi gen untuk mendapatkan kefungsian gen yang diinginkan.
Proses
Pisahkan DNA kepentingan dari organisma dan dimasukkan ke dalam vektor sekali dan diklonkan	Sudah dikloning DNA dipisahkan dari vektor pertama dan dimasukkan ke vektor kedua dan diklon.
Sisipkan Pergerakan melalui Vektor
Tidak bergerak masuk (DNA faedah) dari satu vektor ke vektor yang lain.	Pindahkan sisipan dari vektor induk ke vektor destinasi.

Ringkasan - Cloning vs Subcloning

Pengklonan mewujudkan sel atau organisma genetik identik dengan gen yang dimasukkan atau DNA yang menarik. Ia meneruskan pemisahan dan penyisipan DNA kepentingan ke dalam vektor dan ungkapan dalam bakteria host. Subcloning berkongsi langkah yang sama dengan pengklonan. Walau bagaimanapun, dalam subcloning, sudah mengkloning serpihan DNA (gen yang menarik) dimasukkan ke dalam vektor dan diubah menjadi bakteris tuan rumah. Itulah perbezaan utama antara kloning dan subcloning.

Rujukan

1. Lodish, Harvey. "DNA Cloning dengan Vectors Plasmid." Biologi Sel Molekul. Edisi ke-4. Perpustakaan Perubatan Negara A.S., 01 Jan 1970. Web. 05 Mac 2017
2. "Subcloning." Wikipedia. Yayasan Wikimedia, 14 Feb. 2017. Web. 06 Mac 2017
3. "Subcloning." Subcloning | Buka artikel Akses | Jurnal Akses Terbuka | Prosiding Persidangan | Penyunting | Pengarang | Pengulas | peristiwa saintifik. N.p., n.d. Web. 06 Mac 2017
4. Wackerhage, Henning. "Bagaimana untuk subclone." Bagaimana untuk subclone. N.p., 01 Jan 1970. Web. 06 Mac 2017

Image Courtesy

1. Prosedur Pengklonan Molekul - Dengan CNX OpenStax [CC BY 4.0], melalui Wikimedia Commons
2. Prosedur Subcloning - Oleh Pemuat naik asal adalah Takometer di Wikipedia Bahasa Inggeris (Dipindah dari en.wikipedia ke Commons.) [CC BY 2.5], melalui Wikimedia Commons