Perbezaan antara ELISA langsung dan tidak langsung

Perbezaan Utama - Langsung vs ELISA Tidak Langsung
 

Enzim immunoassay (ELISA), juga dikenali sebagai immunoassay enzim, adalah ujian serologi yang mengesan antibodi dalam darah. Ia digunakan sebagai alat diagnostik untuk mengetahui sama ada pesakit telah terdedah kepada jenis virus tertentu atau agen antibodi lain (antigen) dan sama ada badan itu telah menghasilkan antibodi terhadap jangkitan. ELISA juga boleh mengenal pasti jangkitan masa lalu dan semasa. Oleh itu, ELISA sering digunakan sebagai ujian prescreening oleh doktor sebelum analisis penyakit mendalam. Ujian ini boleh dilakukan di makmal dengan mengambil sampel darah dari pesakit. Terdapat dua jenis ujian ELISA: ELISA langsung dan ELISA tidak langsung. Perbezaan utama antara ELISA langsung dan tidak langsung adalah bahawa ELISA secara tidak langsung lebih sensitif dan memerlukan penambahan antibodi sekunder sementara terus ELISA kurang sensitif dan hanya menggunakan antibodi utama.

KANDUNGAN
1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama
2. Apakah ELISA Langsung
3. Apakah ELISA Tidak Langsung?
4. Side by Side Comparison - Langsung vs ELISA Tidak Langsung
5. Ringkasan

Apakah Direct ELISA?

ELISA adalah ujian diagnostik penyakit yang dilakukan untuk mengenal pasti kehadiran antigen atau antibodi tertentu dalam darah. Ia dilakukan sebagai ujian plat. Ia menggunakan antibodi yang dikaitkan dengan enzim mudah diuji. Kehadiran antigen dalam sampel serum mengikat dengan antibodi tertentu yang dikaitkan dengan enzim. Dalam langkah terakhir, satu substrat tertentu ditambah untuk bertindak balas dengan enzim. Enzim menukar substrat menjadi produk yang berwarna atau menghasilkan isyarat. Perubahan warna dalam substrat kimia mendedahkan kehadiran antibodi tertentu dalam sampel serum. Ujian ELISA langsung hanya menggunakan antibodi utama yang dikaitkan dengan enzim. Setelah mengikat antigen, ia dengan cepat mengubah warna, menunjukkan kehadiran agen berjangkit dalam darah. Walau bagaimanapun, intensiti isyarat adalah lebih lemah dalam ELISA secara langsung kerana epitope terhad kepada mengikat antigen. Oleh itu, ELISA terus kurang sensitif berbanding dengan ELISA tidak langsung.

Rajah 01: Ujian ELISA Langsung

Apakah ELISA Tidak Langsung??

ELISA boleh dilakukan menggunakan dua jenis antibodi iaitu; antibodi utama dan antibodi sekunder. Peralatan ELISA tidak langsung menggunakan kedua-dua jenis antibodi untuk menguatkan isyarat untuk pengesanan yang lebih baik. Teknik ELISA tidak langsung dilakukan seperti berikut.

1. Plat diinkubasi dengan antigen dan dibasuh untuk menghalang pengikatan tidak spesifik.
2. Kemudian antibodi primer ditambah dan dibasuh.
3. Antibodi menengah yang berkaitan dengan enzim ditambah dan dibasuh.
4. Satu substrat ditambah dan dibenarkan bertindak balas dengan enzim.
5. Isyarat dikesan, dan kehadiran atau ketiadaan antigen spesifik dalam sampel dikenalpasti.

Dalam ujian ELISA tidak langsung, beberapa antibodi menengah boleh terikat dengan antibodi utama tunggal. Antibodi sekunder dikaitkan dengan enzim mudah diuji. Oleh itu, satu mengikat boleh membuat isyarat kuat kerana lebih daripada satu interaksi. Oleh itu, ELISA tidak langsung lebih sensitif daripada ELISA langsung. Walau bagaimanapun, ELISA tidak langsung boleh membuat isyarat tidak spesifik disebabkan oleh tindak balas balas antibodi sekunder.

Rajah 02: Ujian ELISA tidak langsung

Apakah perbezaan antara ELISA Langsung dan Tidak Langsung??

Langsung vs ELISA tidak langsung
ELISA langsung kurang sensitif berbanding ELISA tidak langsung.	ELISA tidak langsung lebih sensitif.
Masa yang diambil
Ujian ELISA langsung adalah proses yang cepat.	ELISA tidak langsung memakan masa.
Penggunaan Antibodi
Hanya satu jenis antibodi (antibodi utama) yang digunakan dalam ELISA langsung.	Antibodi primer dan sekunder digunakan untuk ELISA tidak langsung.
Pautan dengan Enzim
Antibodi utama dikaitkan dengan enzim.	Antibodi sekunder dikaitkan dengan enzim.
Penyelarasan Semula Antibodi Kedua
ELISA langsung menghilangkan reaktiviti silang antibodi kedua.	ELISA tidak langsung terjejas dengan reaktiviti silang antibodi kedua.
Isyarat
Isyarat lemah berbanding dengan ELISA tidak langsung.	Isyarat dikuatkan dalam ELISA tidak langsung. Oleh itu, ia mudah dikesan.

Ringkasan - Langsung vs ELISA Tidak Langsung

ELISA adalah teknik biokimia yang digunakan terutamanya dalam imunologi untuk mengesan kehadiran antibodi atau antigen dalam sampel darah pesakit. Ia boleh dilakukan melalui dua proses yang dikenali sebagai ELISA langsung atau tidak langsung. Ujian ELISA langsung hanya menggunakan antibodi utama untuk mengesan antigen manakala ELISA secara tidak langsung menggunakan kedua-dua antibodi primer dan sekunder. Dalam ELISA langsung, antibodi utama diberi label sedangkan dalam antibodi kedua ELISA tidak langsung dilabel. Ini adalah perbezaan antara ELISA langsung dan tidak langsung.

Rujukan
1. "Enzim imunosorben berkaitan enzim (ELISA)." Buletin Pertubuhan Kesihatan Sedunia. Perpustakaan Perubatan Negara A.S., 1976. Web. 29 Mac 2017
2. Loon, A. M van, J. T Van Der Logt, F. W. Heessen, dan J. Van Der Veen. "Enzim imunosorben berkaitan enzim yang menggunakan antigen berlabel untuk mengesan immunoglobulin M dan A antibodi dalam toxoplasmosis: perbandingan dengan immunofluorescence tidak langsung dan asid enzim yang berkaitan dengan enzim dua-sandwich." Jurnal Mikrobiologi Klinikal. Perpustakaan Perubatan Negara A.S., Jun 1983. Web. 29 Mac 2017

Image Courtesy:
1. "Rajah ELISA" Oleh Cavitri - Kerja sendiri (CC BY 3.0) melalui Wikimedia Commons 
2. "ELISA tidak langsung" Oleh Cawang - Kerja sendiri (CC0) melalui Wikimedia Commons