Perbezaan Antara Pengekstrakan DNA dan RNA

Perbezaan Utama - DNA vs RNA Extraction
 

Kajian DNA dan RNA adalah aspek penting untuk memahami konsep asas biologi molekul, bioteknologi, dan genetik. Pengambilan sampel DNA dan RNA tulen diperlukan untuk menjalankan prosedur eksperimen semasa kajian ini. Perbezaan utama antara pengekstrakan DNA dan RNA ialah Proses pengekstrakan DNA membersihkan DNA sementara pengekstrakan RNA membersihkan RNA. Proses pengekstrakan DNA mempunyai tiga langkah berbeza: lisis sel dan katabolisme lipid membran dan protein, clumping katabolol oleh larutan garam pekat dan pemendakan DNA dengan etanol. Tatacara tiga langkah boleh terdiri daripada dua langkah pilihan. Proses penulenan RNA terdiri daripada empat langkah yang berbeza: penambahan guanidium thiocyanate untuk lisis sel, denaturasi protein termasuk ribonucleases, pemisahan RNA dengan penambahan kloroform dan fenol dan pencucian dendam menggunakan etanol.

KANDUNGAN

1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama
2. Apakah Pengekstrakan DNA
3. Apa itu Pengekstrakan RNA
4. Kesamaan Antara Pengekstrakan DNA dan RNA
5. Side by Side Comparison - DNA vs RNA Extraction in Form Tabular
6. Ringkasan

Apakah pengekstrakan DNA?

Pengekstrakan DNA adalah proses fizikal dan kimia yang digunakan untuk membersihkan DNA dari sampel. Pengekstrakan DNA merupakan aspek penting dalam konteks biologi molekular dan sains forensik. Proses ini terdiri daripada tiga langkah asas. Pada mulanya, sel-sel kepentingan perlu diperolehi. Selanjutnya, lisis sel dipermudahkan untuk memecahkan membran sel, yang membuka sel dan mendedahkan sitoplasma bersama dengan DNA. Surfaktan atau bahan pencuci lain boleh digunakan untuk melegakan lipid dari membran sel manakala protein yang hadir dikuburkan oleh protease. Ini adalah langkah pilihan. Sebaik sahaja sel dilepaskan, pukal molekul catabolized dipermudah oleh penyelesaian garam pekat. Ia diikuti dengan sentrifugasi penyelesaian yang memisahkan rumpun serpihan dari DNA. Pada peringkat ini, DNA yang dibezakan bercampur dengan reagen dan garam yang digunakan semasa kitaran sel.

Rajah 01: Pengekstrakan DNA

Untuk memulihkannya lagi, langkah-langkah berikut boleh digunakan. Satu kaedah ialah pemendakan etanol, yang melibatkan campuran etanol ais sejuk dengan sampel DNA yang dipisahkan. DNA tidak larut dalam alkohol dan dengan itu menghasilkan pelet kerana pengagregatan molekul DNA bersama. Sodium acetate ditambah dalam proses ini untuk meningkatkan tahap hujan dengan meningkatkan kekuatan ionik. Selain proses pemendakan etanol, proses pengekstrakan fenol-kloroform juga boleh diinduksi untuk ini. Dalam kaedah ini, denen dinamakan protein dalam sampel. Setelah disentrifugasi, protein denatured akan kekal dalam fasa organik manakala molekul DNA yang bercampur dengan kloroform akan hadir dalam fasa berair. Chloroform akan mengeluarkan sisa fenol. Setelah pengekstrakan selesai, DNA disimpan dibubarkan dalam penampan TE atau air tulen ultra.

Apakah pengekstrakan RNA??

Pembersihan RNA adalah proses yang mana RNA disucikan dari sampel biologi. Oleh kerana adanya ribonuclease dalam sel dan tisu, proses ini rumit. Enzim Ribonuclease mempunyai keupayaan untuk menurunkan RNA dengan cepat. Sifat kimia ribonucleases sangat stabil, dan sukar untuk tidak mengaktifkannya. Meneutralkan ribonucleases adalah pilihan. Oleh kerana enzim ini adalah di mana-mana di dalam sel-sel dan tisu, teknik-teknik khas dikembangkan untuk pengekstrakan RNA. Daripada banyak kaedah, kaedah umum adalah pengekstrakan Guanidinium thiocynate-phenol-chloroform.

Rajah 02: Pengekstrakan RNA

Kaedah pengekstrakan Guanidinium thiocynate-phenol-chloroform bergantung kepada sentrifugasi dan pemisahan fasa. Campuran untuk disentrifugasi terdiri daripada sampel air dan larutan tepu air yang terdiri daripada fenol dan kloroform. Apabila disentrifugasi, penyelesaiannya terdiri daripada fasa akueus atas dan fasa organik yang lebih rendah di bawah keadaan pH neutral (pH 7-8). RNA hadir dalam fasa akueus. Fasa organik biasanya terdiri daripada protein yang dibubarkan dalam fenol dan lipid yang dibubarkan dalam kloroform. Ejen chaotropic (molekul yang mempunyai keupayaan untuk memecahkan ikatan hidrogen antara molekul air) ditambah; ini dikenali sebagai, guanidinium thiocyanate. Ejen ini mempunyai keupayaan untuk menafikan protein yang termasuk ribonucleases yang boleh merendahkan RNA dan terlibat dalam lisis sel. Ia juga memisahkan rRNA daripada protein ribosom. Langkah terakhir penyucian RNA adalah membasuh hujan fasa berair dengan etanol. RNA juga boleh disucikan menggunakan nitrogen cecair.

Apakah Kesamaan Antara Pengekstrakan DNA dan RNA?

• Kedua-dua proses pengekstrakan menggunakan bahan kimia berbahaya seperti fenol dan kloroform.
• Centrifugation adalah teknik penting untuk kedua-dua proses.
• Etanol digunakan untuk membasuh endapan dan mendapatkan DNA atau RNA yang telah dimurnikan.

Apakah Perbezaan Antara Pengekstrakan DNA dan RNA?

DNA vs RNA Extraction
Pengekstrakan DNA adalah proses yang mengekstrak DNA dari organisme atau sampel.	Pengekstrakan RNA adalah proses yang mengekstrak RNA dari sampel.
Langkah-langkah
Proses pengekstrakan DNA terdiri daripada tiga langkah yang berbeza dengan dua langkah pilihan.	Proses pengekstrakan RNA terdiri daripada empat langkah yang berbeza.
Reagen
Surfaktan, protease (pilihan), alkohol, kloroform, fenol, natrium asetat digunakan untuk pengekstrakan DNA.	Guanidium thiocyanate, kloroform, phenol, etanol digunakan untuk pengekstrakan RNA.

Ringkasan - DNA vs RNA Extraction

Pengekstrakan DNA dan RNA adalah aspek penting dari prosedur percubaan untuk kajian biologi molekul, genetik, dan bioteknologi. Kedua-dua proses melibatkan reagen yang sama, tetapi pengekstrakan RNA menggunakan reagen khusus yang dikenali sebagai Guanidium thiocyanate yang mengurangkan aktiviti ribonucleases. Ini adalah perbezaan utama antara pengekstrakan DNA dan RNA.

Muat turun Versi PDF DNA vs RNA Extraction

Anda boleh memuat turun versi PDF artikel ini dan menggunakannya untuk tujuan luar talian seperti nota kutipan. Sila muat turun versi PDF di sini Perbezaan antara Pengekstrakan DNA dan RNA

Rujukan:

1. Chomczynski, P, dan N Sacchi. "Kaedah Single-Step isolasi RNA oleh pengambilan asid guanidinium thiocyanate-Phenol-Chloroform." Biokimia analitik., Perpustakaan Perubatan Negara A.S., Apr. 1987, Boleh didapati di sini. Diakses 31 Ogos 2017
2. Hindawi. "DNA, RNA, dan Pengambilan Protein: Past dan Present." BioMed Research International, Hindawi, Nov. 30, 2009, Available here. Diakses 31 Ogos 2017.

Image Courtesy:

1. "DNA yang diekstrak daripada alpukat" Oleh Mike Seyfang - asalnya dipasangkan kepada Flickr sebagai kejayaan (CC BY 2.0) melalui Wikimedia Commons
2. "Pengekstrakan PhOH-CHCl3" Oleh Squidonius (bercakap) - Kerja sendiri (Teks asal: buatan sendiri) (Domain Awam) melalui Wikimedia Commons