Reaksi rantai polimerase (PCR) adalah kaedah penguatan DNA yang digunakan dalam aplikasi Biologi Molekul. Ia adalah teknik yang biasa digunakan yang membuat berjuta-juta hingga berbilion salinan urutan DNA yang sangat berminat. Ia adalah dalam vitro kaedah yang dilakukan di makmal. Teknik PCR bergantung sepenuhnya pada polimerase DNA yang dihasilkan secara komersial yang dipanggil Taq polimerase. Dan juga ia memerlukan beberapa komponen lain dan penyelenggaraan suhu yang betul. Satu komponen penting adalah primer. Primer adalah urutan DNA pendek yang direka khas untuk urutan DNA sasaran. Mereka biasanya sekitar 20 nukleotida panjang. Taq polimerase mempelbagaikan penambahan nukleotida ke urutan nukleotida yang sudah ada sebelumnya. Oleh itu, primer dipakai sebagai titik awal sintesis helaian baru. Taq polimerase berfungsi hanya dalam arah 5 'hingga 3' maka sintesis DNA berlaku dalam arah 5 'hingga 3 yang sama. Oleh kerana DNA adalah dua daratan, dua jenis primer diperlukan dalam PCR. Mereka dikenali sebagai buku primer dan pembalikan primer. Primer ke hadapan dan terbalik dipanggil berdasarkan arah pemanjangan primer di DNA apabila sintesis DNA berlaku. Teruskan anneal primer dengan helai DNA antisense dan memulakan sintesis + ve strand gen ke arah 5 'hingga 3'. Reverse anneal primer dengan selak akal dan memulakan sintesis sehelai pelengkap strand pengekodan; yang merupakan sekumpulan gen ke arah 5'3 '. Ini adalah perbezaan utama antara muka dan pembalik utama.
1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama
2. Apakah Primer Teruskan
3. Apakah yang dimaksudkan dengan Reverse Primer
4. Persamaan Antara Teruskan dan Reverse Primer
5. Sampingan Side by Side - Forward vs Reverse Primer dalam Borang Tabular
6. Ringkasan
Orientasi maju adalah sintesis pengikodan pengekodan atau indeks gen tertentu. Taq polimerase mempelbagaikan sintesis sebatian baru dalam arah 5 'hingga 3'. Sintesis pengikatan strand berlaku apabila anneal buku asas dengan noncoding atau tali antisense dan memanjangkan arah 5 'hingga 3'.
Rajah 01: Forward dan Reverse Primer
Primer yang anneals dengan untai antisense atau strand noncoding atau strand template dikenali sebagai primer ke hadapan sejak primer bertindak sebagai titik permulaan kepada sintesis pengekodan atau strand positif gen. Primer hadapan mempunyai susunan nukleotida pendek yang melengkapi dengan 3 'ujung sampingan antihenor untai. Ia menghambridkan dengan helai antisens dan memudahkan polimerase Taq untuk menambah nukleotida yang melengkapi helai template.
Primer terbalik adalah urutan DNA pendek yang anneals dengan 3 'akhir dari ura induk atau pengikatan strand. Primer terbalik berfungsi sebagai titik permulaan untuk mensintesis sebatian pelengkap urutan pengekodan atau urutan tidak berkod. Primer terbalik direka pelengkap kepada 3 'akhir pengikatan strand. Oleh itu, ia anneal dengan mengikat 3 'akhir pengikatan strand dan membolehkan Taq polimerase untuk mensintesis strand antisense atau strand template. Oleh kerana orientasinya dalam cara yang terbalik, buku asas ini dilabelkan sebagai primer pembalik.
Kedua-dua pembalik dan penyerang utama adalah penting untuk penghasilan berjuta-juta hingga berbilion-bilion salinan kawasan tertentu DNA yang disasarkan atau berminat.
Forward Primer vs Reverse Primer | |
Primer ke hadapan adalah urutan DNA pendek yang menyerap hibrid dengan 3 'penghujung noncoding atau helai template gen dan berfungsi sebagai titik permulaan untuk mensintesis urutan pengekodan. | Primer terbalik adalah urutan DNA pendek yang menyerap hibrid dengan 3 'akhir pengekodan atau unggun nontemplat dan berfungsi sebagai titik permulaan untuk mensintesis turutan noncoding. |
Strike Annealing | |
Teruskan anneal primer dengan helai templat. | Anneal primer balik dengan helai nontemplat. |
Hasil Urutan Baru | |
Primer hadapan memudahkan sintesis urutan pengekodan. | Primer terbalik memudahkan sintesis urutan tidak berkod. |
Terdapat dua jenis primer yang terlibat dalam teknik PCR. Mereka maju ke hadapan dan terbalik. Berdasarkan pemanjangan primer dalam sintesis silikon DNA baru, primer ini dilabelkan atau dinamakan. Taq polimerase mensintesiskan DNA baru dalam orientasi 5 'ke 3'. Oleh itu, primer direka sebagai pelengkap kepada 3 'hujung helai berganda. Primer ke hadapan yang memanjang di arah 5 'ke 3' menghambridkan dengan 3 'akhir antisense atau templat atau urutan noncoding. Ia berfungsi sebagai titik permulaan untuk mensintesis urutan pengekodan. Primer terbalik yang memanjangkan arah 5 'hingga 3' membahayakan dengan 3 'akhir pengekodan atau nontemplate atau jarum akal. Ia berfungsi sebagai titik permulaan untuk mensintesis urutan tidak berkod. Ini adalah perbezaan antara buku asas ke hadapan dan belakang.
1. "Primer (biologi molekul)." Wikipedia, Yayasan Wikimedia, 20 Feb. 2018. Boleh didapati di sini
2. "tindak balas rantai polimerase (PCR)." Khan Academy. Terdapat di sini
1.'Primers RevComp Melted2'By Richard Wheeler (Zephyris) - Kerja sendiri, (CC BY-SA 3.0) melalui Wikimedia Commons