Perbezaan Antara Perbahasan Nick dan Tambahan Primer

Perbezaan Utama - Nick Translation vs Extension Primer
 

Terjemahan Nick dan sambungan primer adalah dua teknik penting yang dilakukan dalam biologi Molekul. Perbezaan utama antara terjemahan nick dan sambungan primer ialah proses terjemahan nick menghasilkan probe berlabel untuk teknik hibridisasi lain sementara kaedah lanjutan primer mengenal pasti urutan RNA tertentu dari campuran dan mendedahkan maklumat mengenai ungkapan mRNA. Kedua-dua teknik ini amat penting dan dilakukan secara rapi dalam makmal penyelidikan molekul.

KANDUNGAN
1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama
2. Apakah Terjemahan Nick
3. Apakah Extension Primer
4. Side by Side Comparison - Nick Translation vs Primer Extension
5. Ringkasan

Apakah penterjemahan Nick??

Terjemahan Nick adalah teknik penting yang digunakan untuk menyediakan probe dilabel untuk pelbagai teknik biologi molekular seperti membungkus, in situ hibridisasi, pendarfluor in situ hibridisasi dan lain-lain dalam vitro kaedah label DNA. Probe DNA digunakan untuk mengenal pasti urutan DNA atau RNA tertentu. Dengan bantuan siasatan berlabel, serpihan spesifik dapat ditandai atau divisualisasikan dari campuran kompleks asid nukleik. Oleh itu, probe berlabel disediakan menggunakan pelbagai teknik untuk digunakan untuk teknik yang berbeza. Terjemahan Nick adalah salah satu kaedah yang menghasilkan probe berlabel dengan bantuan enzim DNase 1 dan DNA polimerase 1.

Proses terjemahan nick bermula dengan aktiviti enzim DNase 1. DNase 1 memperkenalkan nicks pada tulang belakang fosfat DNA terkandas ganda dengan menahan ikatan fosfodiester antara nukleotida. Apabila nick dibuat secara percuma 3 'OH kumpulan nukleotida akan dihasilkan dan polimerase 1 enzim DNA akan bertindak di atasnya. 5 'hingga 3' aktiviti exonuclease DNA polimerase 1 menghilangkan nukleotida dari nikel ke arah arah '3 untaian DNA. Pada masa yang sama, aktiviti polimerase enzim polimerase 1 berfungsi dan menambah nukleotida untuk menggantikan nukleotida yang dikeluarkan. Jika nukleotida dilabel, penggantian akan berlaku oleh nukleotida berlabel dan ia akan menandakan DNA untuk pengenalpastian. DNA berlabel yang disintesis ini boleh digunakan sebagai probe dalam pelbagai tindak balas hibridisasi dalam Biologi Molekul.

Rajah 01: Proses penterjemahan Nick

Apakah Peluasan Primer?

Lanjutan primer adalah teknik yang digunakan untuk mencari urutan RNA spesifik dari campuran RNA dan mencari 5 'akhir transkrip mRNA. Ia juga digunakan untuk mengkaji struktur RNA dan ungkapan. Kaedah pelanjutan primer dilakukan dengan primers berlabel atau dengan nukleotida berlabel. Sekiranya berlabel primers digunakan, ia tidak termasuk keperluan pelabelan nukleotida yang digunakan untuk sintesis cDNA. Terdapat beberapa langkah dalam teknik ini. Ia bermula dengan pengekstrakan RNA dari sampel. Kemudian primer oligonukleotide yang dilabel ditambahkan kepada campuran bersama-sama dengan bahan-bahan yang diperlukan untuk mensintesiskan cDNA urutan RNA tertentu. Primer anneals dengan urutan pelengkap dari campuran. Menggunakan turunan annei primer sebagai templat, transkripase enzim terbalik mensintesiskan DNA pelengkap (cDNA) urutan RNA. Penyepitan primer dan transkripsi terbalik hanya berlaku apabila urutan RNA spesifik ada dalam sampel. Akhirnya, apabila penentuan elektroforesis gel dilakukan, saiz urutan RNA dapat ditentukan. Ia juga mudah untuk mencari asas +1 urutan mRNA (tapak permulaan transkripsi) dengan kaedah lanjutan primer. Jumlah mRNA yang terdapat di dalam sampel boleh dikira dengan kaedah ini jika lebihan primer digunakan.

Rajah 02: Pelanjutan primer

Apakah perbezaan antara Penerjemahan Nick dan Tambahan Primer?

Nick Translation vs Extension Primer
Terjemahan Nick adalah proses yang menghasilkan probe DNA berlabel untuk pelbagai tindak balas hibridisasi.	Lanjutan primer adalah teknik yang digunakan untuk mencari RNA khusus atau untuk mengkaji ekspresi gen.
Enzim Digunakan
Enzim DNase 1 dan polimerase DNA digunakan.	Enzim transkrip sebaliknya digunakan.
Kepentingan
Terjemahan Nick memudahkan penandaan urutan DNA tertentu.	Lanjutan primer membolehkan pengesanan saiz urutan mRNA tertentu dan jumlah yang ada dalam sampel.

Ringkasan - Terjemahan Nick vs Tambahan Primer

Terjemahan Nick adalah kaedah yang digunakan untuk mensintesis probes berlabel berdasarkan aktiviti DNase 1 dan E coli Enzim polimerase DNA 1. Ia adalah dalam vitro kaedah yang digunakan dalam makmal sebelum teknik hibridisasi yang berlainan. Semasa terjemahan nick, aktiviti 5'-3 'exonuclease DNA polimerase 1 membuang nukleotida menjelang aktiviti nick dan polimerase polimerase DNA 1 menggantikan nukleotida yang dikeluarkan dengan nukleotida berlabel di sebalik nick. Pelanjutan primer adalah kaedah yang digunakan untuk mengesan transkrip RNA khusus dari campuran dan mengukur saiz dan jumlah RNA yang menarik. Ini adalah perbezaan antara terjemahan nick dan sambungan primer.

Rujukan
1. Reid, Alex. "Terjemahan Nick." Springer. N.p., n.d. Web. 18 Apr. 2017
2. "Peluasan Primer." Diagnostik Kebangsaan. N.p., n.d. Web. 19 Apr. 2017
3. Kuo, M. T., dan W. Plunkett. "Nick-translasi kromosom metaphase: pelabelan in vitro kawasan nukleus-hipersensitif dalam kromosom." Prosiding Akademi Sains Kebangsaan Amerika Syarikat. Perpustakaan Kebangsaan Perubatan A.S., Feb. 1985. Web. 19 Apr. 2017
4. Raymond et al. "Mudah, kuantitatif primer-lanjutan ujian PCR untuk pemantauan langsung mikroRNAs dan RNA pendek yang mengganggu." RNA. Hak Cipta 2005 oleh RNA Society, Nov. 2005. Web. 19 Apr. 2017

Image Courtesy:
1. "Asser Extension Assay" Oleh Jjnmmnjj - Kerja sendiri (CC BY-SA 3.0) melalui Wikimedia Commons