Perbezaan antara Blotting Selatan Selatan dan Barat

Perbezaan Utama - Northern vs Southern vs Western Blotting
 

Pengesanan urutan DNA, RNA, dan protein tertentu adalah penting untuk pelbagai jenis kajian dalam biologi Molekul. Elektroforesis Gel adalah teknik yang memisahkan DNA, RNA, dan protein mengikut saiznya. Dari profil gel, urutan DNA tertentu, urutan RNA, atau protein dikesan oleh teknik khusus yang disebut pembungkus dan hibridisasi dengan probe berlabel. Terdapat tiga jenis kaedah membungkus iaitu selatan, utara dan barat. Perbezaan utama antara pembungaan utara dan barat utara terletak dengan jenis molekul yang dideteksi dari sampel. Blotting Selatan adalah kaedah yang mengesan urutan DNA tertentu dari sampel DNA. Blotting Utara adalah teknik yang mengesan urutan RNA tertentu dari sampel RNA. Blotting Barat adalah kaedah yang mengesan protein tertentu dari sampel protein.

KANDUNGAN
1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama
2. Apa itu Blotting Selatan
3. Apa itu Blotting Utara
4. Apa itu Blotting Barat
5. Side by Side Comparison - Northern vs Southern vs Western Blotting
6. Ringkasan

Apa itu Blotting Selatan?

Teknik blotting selatan dibangunkan oleh E. M. Southern pada tahun 1975 untuk mengenal pasti urutan DNA tertentu dari sampel DNA. Ini adalah teknik blotting pertama yang diperkenalkan dalam biologi molekul. Ia membolehkan pengesanan gen spesifik dari DNA, serpihan spesifik dari DNA, dan lain-lain. Terdapat beberapa langkah yang terlibat dalam teknik blotting selatan. Mereka adalah seperti berikut.

1. DNA diasingkan dari sampel dan dicerna dengan endonucleases sekatan.
2. Sampel yang dicerna dipisahkan oleh elektroforesis gel Agarose.
3. Serpihan DNA di dalam gel dilarang menjadi satu helai dengan menggunakan larutan alkali.
4. DNA terkandarkan tunggal dipindahkan ke membran penapis nitrocellulosa oleh pemindahan kapilari.
5. DNA yang dipindahkan adalah tetap ke membran secara kekal.
6. DNA tetap pada membran adalah hibridisasi dengan probe berlabel.
7. DNA tidak terjual dibasuh dari membran dengan membasuh.
8. Filem sinar-X terdedah kepada membran dan autoradiograph disediakan.

Pembengkakan di selatan diterapkan untuk aspek biologi molekul yang berlainan. Ia berguna dalam pemetaan RFLP, kajian forensik, metilasi DNA dalam ekspresi gen, pengesanan gen yang bermutasi dalam gangguan genetik, sidik jari DNA, dan sebagainya..

Rajah 01: Teknik Blotting Selatan

Apa itu Blotting Utara?

Blotting Utara adalah kaedah yang direka untuk mengesan urutan RNA tertentu atau urutan mRNA dari sampel untuk mengkaji ekspresi gen. Teknik ini dibangunkan oleh Alwine, Kemp, dan Stark pada tahun 1979. Ia berbeza dari teknik sourledn dan barat kerana beberapa langkah. Walau bagaimanapun, teknik ini juga dilakukan melalui elektroforesis gel, pemadat, dan hibridisasi dengan probe dan pengesanan berlabel tertentu. Teknik blotting Utara dilakukan seperti berikut.

1. RNA diekstrak dari sampel dan dipisahkan oleh elektroforesis gel.
2. RNA dipindahkan dari gel ke membran membungkus dan tetap.
3. Membran ini dirawat dengan probe berlabel yang disediakan dari cDNA atau RNA (siasatan adalah pelengkap kepada urutan tertentu dalam sampel).
4. Siasatan diinkubasi dengan membran untuk mengikat dengan urutan tertentu.
5. Probe tidak dapat dibuang.
6. Serpihan hibrid dikesan oleh autoradiograph.

Blotting Utara adalah alat penting dalam pengesanan dan kuantifikasi mRNA hibridisasi, mengkaji kemerosotan RNA, penilaian kehidupan separuh RNA, pengesanan splicing RNA, mengkaji ekspresi gen, dan sebagainya..

Rajah 02: Blotting Utara

Apa itu Blotting Barat?

Blotting Barat adalah kaedah untuk mengesan protein tertentu dari campuran protein dengan menggunakan antibodi berlabel. Oleh itu, kutu barat juga dikenali sebagai imunoblot. Teknik ini diperkenalkan oleh Towbin et al pada tahun 1979 dan kini secara rutin dilakukan di makmal untuk analisis protein. Langkah-langkah adalah seperti berikut.

1. Protein diekstrak dari sampel
2. Protein dipisahkan dengan saiz mereka menggunakan elektroforesis gel polyacrylamide
3. Molekul yang dipisahkan dipindahkan ke dalam membran PVDF atau membran nitroselulosa dengan electroporation
4. Membran disekat untuk mengikat spesifik dengan antibodi
5. Protein yang dipindahkan terikat dengan antibodi utama (antibodi berlabel enzim).
6. Membran dibasuh untuk membuang antibodi utama yang tidak terikat secara spesifik
7. Antibodi terikat dikesan dengan menambah substrat dan mengesan pendarahan berwarna terbentuk

Pembengkakan Barat berguna dalam mengesan antibodi anti-HIV dalam sampel serum manusia. Blot Barat juga boleh digunakan sebagai ujian pengesahan untuk jangkitan Hepatitis B dan ujian definitif untuk penyakit lembu gila.

Rajah 03: Blotting Barat

Apakah perbezaan antara Southern Blotting Selatan dan Barat??

Northern vs Southern vs Western Blotting
Jenis Molekul Dikesan
Blotting Utara	Blotting Utara mengesan urutan RNA tertentu dari sampel RNA.
Blotting Selatan	Blotting di selatan mengesan urutan DNA tertentu dari sampel DNA.
Blotting Barat	Blotting Barat mengesan protein tertentu dari sampel protein.
Jenis Gel
Blotting Utara	Ini menggunakan gel Agarose / formaldehid.
Blotting Selatan	Ini menggunakan gel Agarose.
Blotting Barat	Ini menggunakan gel Polyacrylamide.
Kaedah Blotting
Blotting Utara	Ini adalah pemindahan kapilari.
Blotting Selatan	Ini adalah pemindahan kapilari.
Blotting Barat	Ini adalah pemindahan elektrik.
Probes Digunakan
Blotting Utara	Proksi cDNA atau RNA dilabelkan secara radioaktif atau bukan radioaktif.
Blotting Selatan	Probe DNA dilabel radioaktif atau tidak secara radioaktif.
Blotting Barat	Antibodi utama digunakan sebagai probe.
Sistem Pengesanan
Blotting Utara	Ini dilakukan menggunakan autoradiograph, atau pengesanan perubahan cahaya atau warna.
Blotting Selatan	Ini dilakukan menggunakan autoradiograph, pengesanan perubahan cahaya atau warna.
Blotting Barat	Ini dilakukan menggunakan pengesanan perubahan cahaya atau warna.

Ringkasan - Northern vs Southern vs Western Blotting

Blotting adalah teknik khas yang dibangunkan untuk mengenal pasti DNA, RNA atau protein tertentu dari sampel. Terdapat tiga prosedur pembungkusan berasingan, iaitu utara, selatan dan barat, untuk mengesan jenis molekul tertentu. Teknik pemotongan utara direka untuk mengesan urutan RNA tertentu dari campuran RNA. Teknik blotting Selatan membolehkan pengesanan jujukan DNA tertentu dari sampel DNA dan teknik pemotongan barat dibangunkan untuk mengenal pasti protein tertentu dari campuran protein.

Rujukan
1. Gibbons, Janay. "Blot Barat: Gambaran Keseluruhan Pemindahan Protein." Jurnal Sains Perubatan Amerika Utara. Medknow Publications & Media Pvt Ltd, Mac. 2014. Web. 27 Mac 2017
2. Brown, T. "Blotting Selatan." Protokol semasa dalam imunologi. Perpustakaan Perubatan Negara A.S., Mei 2001. Web. 27 Mac 2017
3. Dia, Shan L. "Blot Utara." Kaedah dalam enzim. Perpustakaan Perubatan Negara A.S., 2013. Web. 27 Mac 2017

Image Courtesy:
1. "Skim Blot Utara" Oleh RNA405 - Kerja sendiri (Domain Awam) melalui Wikimedia Commons
2. "Blot Barat 114A" Oleh Amanthabagdon - Kerja sendiri (Domain Awam) melalui Wikimedia Commons