Kromatografi kertas, kromatografi lapisan nipis, dan kromatografi lajur adalah tiga jenis teknik kromatografi. The perbezaan utama antara kromatografi kertas, kromatografi lapisan nipis dan kromatografi lajur adalah berdasarkan jenis fasa pegun yang digunakan dalam teknik kromatografi. Kromatografi kertas menggunakan kertas selulosa sebagai fasa pegunnya, Kromatografi Thin Layer menggunakan alumina atau gel silika sebagai fasa pegunnya, manakala Kromatografi lajur menggunakan lajur yang penuh dengan bahan matriks yang sesuai sebagai fasa pegun.
Dalam proses pemisahan dan pengenalan biomolekul seperti protein dan karbohidrat, kromatografi adalah teknik biofisik penting yang digunakan. Kromatografi memisahkan sebatian berdasarkan kelarutan, saiz dan cajnya. Berdasarkan mekanisme pemisahan, kromatografi menggunakan mekanisme seperti pertukaran ion, penyerapan, pembahagian dan saiz pengecualian dan terdapat tiga teknik kromatografi; iaitu kertas, lapisan nipis, dan kromatografi lajur. Kromatografi kertas didasarkan pada penjerapan pepejal-cecair dan kelarutan sebatian, dan ia menggunakan kertas selulosa sebagai fasa pegun. Kromatografi lapisan nipis adalah berdasarkan penjerapan cecair pepejal molekul. Ia mempunyai fasa pegun yang biasanya dibuat daripada alumina atau gel silika dan fasa mudah alih yang merupakan pelarut. Kromatografi lajur menggunakan lajur yang dibungkus dengan matriks yang digunakan untuk memisahkan molekul terutamanya berdasarkan saiz, pertalian atau cajnya..
1. Tinjauan Kromatografi dan Perbezaan Utama
2. Apakah Kromatografi Kertas
3. Apakah Kromatografi Lapisan Nipis
4. Apakah Kromatografi Kolom
5. Kesamaan Antara Kertas, Lapisan Nipis dan Kromatografi Lajur
6. Side by Side Comparison - Kertas vs Thin Layer vs Column Chromatography dalam Borang Tabular
7. Ringkasan
Kromatografi kertas adalah jenis kromatografi yang paling mudah digunakan, dan ia tidak digunakan untuk penyelidikan yang luas. Ia digunakan terutamanya dalam makmal pelajar untuk mengenal pasti biomolekul seperti asid amino dan karbohidrat yang terdapat di dalam campuran. Kromatografi kertas menggunakan fasa pegun yang dibuat menggunakan kertas selulosa atau kertas penapis Whatman dan fasa mudah alih yang biasanya disediakan menggunakan pelarut organik seperti n-butanol, dan sebagainya. Fasa pegun tepu dengan air, menjadikan cecair fasa pegun. Oleh itu, apabila sebatian dikesan dan dibenarkan berjalan di hadapan fasa bergerak, bergantung kepada kelarutan sebatian, ia dipisahkan. Oleh itu, apabila perkembangan kromatogram, pewarnaan boleh dilakukan untuk menentukan jangka panjang setiap sebatian. Faktor pengekalan itu boleh dikira.
Rajah 01: Kromatografi Kertas
Kromatografi kertas boleh diklasifikasikan lagi sebagai kromatografi kertas menaik dan kromatografi kertas turun bergantung kepada arah pelarut yang berjalan.
Kromatografi lapisan nipis atau TLC adalah teknik yang biasa digunakan untuk mengenal pasti asid amino yang berbeza dalam campuran atau untuk mengenal pasti protein. Teknik pemisahan berdasarkan penjerapan cecair pepejal. Semasa kromatografi lapisan nipis, plat yang diperbuat daripada alumina atau gel silika digunakan sebagai fasa pegun. Campuran pelarut berbeza-beza mengikut keperluan dan boleh menggunakan gabungan yang berbeza dari sebatian organik seperti n-butanol, asid asetik, dan air untuk menyediakan pelarut. Sebatian yang dipisahkan akan dilihat di atas pinggan dan direndam dalam campuran pelarut. Apabila pelarut bergerak berdasarkan tindakan kapilari yang diberikan oleh plat, sebatian yang terdapat pada plat juga bergerak bergantung kepada keterlarutannya dalam pelarut.
Rajah 02: Lapisan Kromatografi Lapisan Nipis
Pengesanan bintik-bintik selepas kromatogram dijalankan dengan prosedur pewarnaan yang berlainan. Ada yang menggunakan pewarnaan ninhydrin yang agak cara toksik untuk pewarnaan. Kromatogram lapisan nipis moden menggunakan teknik pendarfluor untuk melihat kromatogram selepas berlari. Bergantung pada jarak yang telah dilalui, masa pengekalan setiap sebatian boleh dikira. Ini boleh digunakan untuk mengenalpasti jenis sebatian yang dipisahkan berdasarkan campuran yang digunakan. TLC terutamanya digunakan untuk mengenal pasti asid amino dalam campuran protein dan juga untuk memisahkan pelbagai jenis monosakarida yang ada dalam campuran.
Kromatografi lajur adalah istilah luas yang digunakan untuk menggambarkan pelbagai jenis teknik kromatografi yang menggunakan kaedah pemisahan mengikut lajur. Dalam kromatografi lajur, lajur fizikal digunakan dengan bahan pembungkus untuk memisahkan sebatian. Pemisahan boleh berdasarkan sifat fizikal yang berbeza yang dipamerkan oleh sebatian. Ciri-ciri ini boleh menjadi caj, saiz, pengesahan 3D dan keupayaan mengikat, dan sebagainya. Oleh itu, ruang yang dibungkus dengan bahan matrik bertindak sebagai fasa pegun dan penampan basuh yang digunakan pada lajur bertindak sebagai fasa bergerak.
Jika molekul dipisahkan berdasarkan ukuran, bahan pembungkus dibungkus dengan cara yang ia meninggalkan liang untuk sebatian untuk bergerak. Oleh itu, molekul yang lebih besar yang tidak dapat mengalir melalui liang dihilangkan terlebih dahulu, sedangkan molekul-molekul yang lebih kecil mengambil masa yang lebih lama untuk elus.
Rajah 03: Kromatografi Ruang
Jika molekul dipisahkan berdasarkan caj mereka, fasa pegun akan mengandungi sama ada anion atau penukar kation yang mana kompaun akan tertarik berdasarkan caj mereka. Oleh itu, semasa proses pembersihan, sebatian tidak terikat akan dielakkan. Apabila menambah penimbal elusi, sebatian dikenakan terikat akan dielakkan. Pengesanan eluen ini kebanyakannya berdasarkan teknik spektrofotometri.
Kertas vs Kromatografi Lajur Lapisan Thin vs | |
Kromatografi Kertas | Kromatografi kertas adalah teknik kromatografi yang menggunakan sebatian berasingan berdasarkan penjerapan cecair-cecair dan kelarutan sebatian. Ia menggunakan kertas selulosa sebagai fasa pegunnya. |
Kromatografi Layer Nipis | Kromatografi lapisan nipis adalah satu lagi teknik kromatografi berdasarkan penjerapan padu cecair molekul. Ia mempunyai fasa pegun yang diperbuat daripada alumina atau silika gel dan pelarut sebagai fasa bergerak, yang merupakan pelarut. |
Kromatografi Lajur | Kromatografi lajur menggunakan lajur yang dibungkus dengan matriks yang digunakan untuk memisahkan molekul terutamanya berdasarkan saiz, pertalian atau cajnya.. |
Fasa pegun | |
Kromatografi Kertas | Kertas yang diperbuat daripada nitrocellulose Whatman digunakan sebagai fasa pegun dalam kromatografi kertas. |
Kromatografi Layer Nipis | Gel alumina atau silika digunakan sebagai fasa pegun kromatografi lapisan nipis. |
Kromatografi Lajur | Satu tiang yang dibungkus dengan bahan pembungkusan yang sesuai digunakan sebagai fasa pegun dalam kromatografi lajur. |
Fasa Mudah Alih | |
Kromatografi Kertas | Pelarut berjalan adalah fasa mudah alih kromatografi kertas. |
Kromatografi Layer Nipis | Pelarut berjalan adalah fasa mudah alih kromatografi lapisan tipis. |
Kromatografi Lajur | Penampan cuci adalah fasa mudah alih kromatografi lajur. |
Mekanisme yang digunakan untuk Pemisahan | |
Kromatografi Kertas | Kromatografi kertas adalah berdasarkan penyerapan pepejal-cecair. |
Kromatografi Layer Nipis | Kromatografi lapisan nipis adalah berdasarkan penyerapan pepejal-cecair. |
Kromatografi Lajur | Kromatografi lajur adalah berdasarkan saiz pengecualian, caj dan bentuk. |
Penimbal Elusi | |
Kromatografi Kertas | Tidak diperlukan oleh kromatografi kertas. |
Kromatografi Layer Nipis | Tidak diperlukan untuk kromatografi lapisan nipis. |
Kromatografi Lajur | Diperlukan dalam kromatografi lajur. |
Pengesanan | |
Kromatografi Kertas | Mengotorkan dan dengan menentukan faktor Retensi. |
Kromatografi Layer Nipis | Mengotorkan dan dengan menentukan faktor Retensi. |
Kromatografi Lajur | Penentuan spektrofotometri. |
Kromatografi kertas, TLC dan kromatografi lajur adalah teknik pemisahan yang digunakan untuk memisahkan biomolekul seperti protein, asid amino dan karbohidrat (terutamanya monosakarida). Kromatografi kertas menggunakan kertas selulosa sebagai fasa pegun, dan mekanisme perpisahan berdasarkan penjerapan pepejal-cecair. TLC juga menggunakan mekanisme penjerapan pepejal-cecair. Molekul dipisahkan pada fasa pegun, bergantung kepada kelarutan mereka dalam fasa bergerak. Kromatografi lajur menggunakan sifat fizikal seperti saiz, bentuk, caj dan berat molekul kompaun untuk dipisahkan. Lajur yang dibungkus dengan bahan matrik bertindak sebagai fasa pegun, sedangkan penampan mencuci bertindak sebagai fasa pelarut. Ini adalah perbezaan di antara kromatografi lapisan dan kraf kertas.
1.Clark, Jim. "THOM LAYER CHROMATOGRAPHY." Lapisan Kromatografi Nipis, 2007. Boleh didapati di sini
2.Coskun, Ozlem. "Teknik Pemisahan: Kromatografi." Klinik Utara Istanbul, Kare Publishing, 2016. Boleh didapati di sini
1. 'tangkiChromatography' (CC BY-SA 3.0) melalui Wikimedia Commons
2.'Tlc urutan 'Dengan Quantockgoblin, (Domain Awam) melalui Wikimedia Commons
3. 'Kolom kromatografi' (Domain Awam) melalui Wikimedia Commons