Perbezaan Antara Halaman SDS dan Laman Asal

Perbezaan Utama - SDS Page vs Native Halaman
 

SDS dan halaman asli adalah dua jenis teknik elektroforesis gel polyacrylamide yang digunakan dalam Biologi Molekul. The perbezaan utama antara SDS Page dan Laman Asli adalah jenis gel polyacrylamide yang digunakan. Oleh itu, dalam SDS Page, gel denasing digunakan, molekul dipisahkan berdasarkan berat molekulnya. Sebaliknya, dalam Halaman Native, gel tidak menentu digunakan. Oleh itu, molekul dipisahkan berdasarkan ukuran, caj dan bentuknya.

Elektroforesis Gel Polyacrylamide (Page) menggunakan gel yang dibuat oleh monomer akrilik polimerisasi dengan metakena bisacrylamide. Polyacrylamide lebih sukar dan haba lebih stabil daripada agarose. Gel polyacrylamide mempunyai saiz liang yang lebih kecil yang membolehkan pemisahan protein yang berkesan. Terdapat dua jenis penetapan Halaman utama iaitu SDS Page dan Halaman Asli. SDS Page atau Elektroforesis gel natrium-Dodekil Sulfat Polyacrylamide gel memisahkan protein berdasarkan berat molekul mereka. Gel yang mempunyai ciri yang digunakan dalam SDS Page. Halaman Native menggunakan gel yang tidak menonjol dan memisahkan protein berdasarkan saiz, caj dan bentuknya (pengesahan 3D).

KANDUNGAN

1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama
2. Apakah SDS Page
3. Apa itu Halaman Asal
4. Kesamaan Antara Halaman SDS dan Laman Asal
5. Side by Side Comparison - SDS Page vs Laman Asal dalam Borang Tabular
6. Ringkasan

Apakah halaman SDS?

SDS Page adalah teknik electrophoretic yang paling biasa digunakan untuk memisahkan protein berdasarkan berat molekul mereka. Gel dibuat dengan menambah SDS (natrium dodecyl sulfate), yang merupakan detergen. Sintesis SDS protein menjadi monomer. SDS adalah detergen anionik. Oleh itu, ia menambahkan caj negatif bersih kepada protein dalam lingkungan pH yang luas. Apabila caj negatif bersih diberikan ke atas molekul protein, disebabkan oleh variasi caj, struktur kompleks dipecahkan. Oleh kerana caj negatif, protein menarik ke arah hujung positif. Oleh itu, molekul-molekul dengan berat molekul yang lebih rendah bergerak lebih cepat pada matriks gel dan boleh dilihat berhampiran dengan anod, manakala protein berat molekul yang lebih tinggi diperhatikan lebih dekat dengan telaga.

Rajah 01: SDS Page

SDS yang mengikat rantaian polipeptida adalah berkadar dengan jisim molekul relatifnya. Oleh itu, jisim molekul juga boleh ditentukan melalui SDS Page. Pewarnaan gel SDS dilakukan oleh pewarnaan bromofenol biru. Penggunaan halaman SDS berkisar pada tahap yang lebih besar di mana ia boleh digunakan untuk menganggarkan jisim molekul relatif dan untuk menentukan kelimpahan relatif protein dalam campuran protein. Page SDS juga boleh digunakan untuk menentukan pengedaran protein dalam campuran protein. SDS Page juga digunakan untuk membersihkan dan menilai protein. Ia digunakan sebagai prosedur awal untuk pembongkaran dan hibridisasi barat, yang seterusnya digunakan untuk pemetaan protein dan pengenalan.

Apakah Native Page?

Eleprophoresis gel Polyacrylamide asli (Native Page) menggunakan gel bukan penapisan. Oleh itu, SDS atau mana-mana ejen menolak lain tidak ditambah ke matriks gel. Dalam Laman Asal, pemisahan protein adalah berdasarkan caj dan saiz protein. Oleh itu, pergerakan protein bergantung pada pertuduhan dan saiz protein.

Tuduhan protein bergantung kepada rantaian sisi asid amino. Sekiranya rantai sampingan dikenakan secara negatif, protein akan menerima caj negatif secara keseluruhan dan sebaliknya. Protein mengekalkan kesesuaian 3D kerana lipat yang berlaku. Hasil lipatan dari beberapa jenis ikatan dalam protein seperti bon disulfida, interaksi hidrofobik dan ikatan hidrogen. Oleh itu, jika Page asli dijalankan pada pH neutral, protein akan dipisahkan mengikut bentuk molekul protein. Oleh itu, Native Page boleh digunakan sebagai teknik yang sensitif untuk mengesan perubahan yang dikenakan atau pengesahan protein.

Kelebihan utama Halaman asli ialah protein yang digunakan untuk analisis Halaman dapat diperoleh kembali dalam keadaan asalnya setelah analisis Laman, karena protein tidak terganggu selama proses. Halaman Native adalah teknik throughput yang agak tinggi, dan kestabilan protein meningkat.

Rajah 02: Native Page

Setelah selesai menjalankan gel, gel Laman Asli boleh dilihat dengan pewarnaan dengan bromophenol biru atau sebarang reagen pewarnaan yang sesuai. Aplikasi Halaman Native termasuk pemisahan protein asid termasuk glikoprotein seperti rekombinan rekombinan manusia erythropoietin atau identifikasi protein yang ada di Bovine Serum Albumin (BSA).

Apakah Kesamaan Antara SDS Page dan Laman Asal?

• Kedua-dua SDS Page dan sistem Laman Asas menggunakan gel polyacrylamide sebagai matriks gel.
• Kedua-duanya digunakan untuk pemisahan dan pengenalan protein.
• Kedua-dua menggunakan mobiliti electrophoretic untuk memisahkan sebatian.
• Kedua-duanya boleh dilakukan dengan cara menegak atau mendatar (kebanyakannya dilakukan sebagai persediaan Halaman menegak kerana panjang run lebih banyak).
• Peralatan electrophoresis termasuk tangki gel, sikat, bekalan kuasa diperlukan untuk operasi kedua-dua teknik.
• Penglihatan gel boleh dilakukan dengan cara pewarnaan dalam kedua-dua teknik.

Apakah Perbezaan Antara Halaman SDS dan Laman Asal?

SDS Page vs Halaman Asal
Halaman SDS atau Laman natrium-dodekil sulfat memisahkan protein berdasarkan berat molekul mereka, dan ia menggunakan gel penapisan.	Halaman Native menggunakan gel yang tidak menonjol dan memisahkan protein berdasarkan saiz, caj dan bentuknya (pengesahan 3D).
Jenis Gel
Gel dening digunakan dalam SDS-halaman.	Gel bukan penapisan digunakan di halaman asal.
Kehadiran SDS
SDS hadir sebagai detergen untuk memberikan caj negatif ke atas sampel dalam halaman SDS.	SDS tidak hadir di halaman asal.
Asas Pengasingan
Pemisahan protein bergantung kepada berat molekul protein dalam halaman SDS.	Pemisahan bergantung kepada saiz dan bentuk molekul protein di halaman asal.
Kestabilan Protein
Kestabilan protein adalah rendah dalam halaman SDS.	Kestabilan protein adalah tinggi di halaman asal.
Pemulihan Protein Asal
Tidak mungkin kerana ia telah disenarai dalam halaman SDS.	Kemungkinan pada halaman asal.

Ringkasan - SDS Page vs Native Halaman

Halaman SDS dan Laman Asli adalah dua jenis teknik elektroforesis gel polyacrylamide yang digunakan untuk memisahkan protein. Halaman SDS dirawat dengan detergen yang dipanggil SDS. SDS menyampaikan caj negatif keseluruhan kepada protein, yang kemudiannya mengakibatkan denaturasi protein. Oleh itu, protein dipisahkan berdasarkan berat molekul mereka. Sebaliknya, teknik Laman Asal tidak menggunakan sebarang ejen denial. Oleh itu, protein dipisahkan berdasarkan ukuran atau bentuknya. Ini adalah perbezaan antara halaman SDS dan halaman asli.

Rujukan:

1. "Prinsip dan Kaedah Elektroforesis Gel Polyacrylamide (SDS-PAGE)." Prinsip dan Kaedah Elektroforesis Gel Polyacrylamide (SDS-PAGE) | MBL Life Sience -ASIA-. Terdapat di sini
2. "Gel Asli". Makmal Protein Alliance | Perkhidmatan Pencirian Biophysical | Terdapat di sini  

Image Courtesy:

1. 'SDS-PAGE Electrophoresis' Dengan Bensaccount di Wikipedia bahasa Inggeris, (CC BY 3.0) melalui Wikimedia Commons  
2.'Buat sampel ke dalam elektroforesis gel polyacrylamide well'By Blaz Nemec dari Ljubljana, Slovenia (CC BY-SA 2.0) melalui Wikimedia Commons