Perbezaan antara Ligase DNA T4 dan T7
Share
Perbezaan Utama - T4 vs T7 DNA Ligase
Ligase DNA adalah enzim penting yang digunakan dalam teknik biologi molekul. Ia berfungsi sebagai gam molekul untuk bergabung dengan nukleotida dengan membentuk ikatan fosfodiester antara nukleotida. Ikatan fosfodiester terbentuk di antara 3 'hidroksil hujung gula dan kumpulan fosfat 5' end. Ligase DNA adalah penting dalam proses replikasi untuk menyertai serpihan Okazaki ketuat yang ketinggalan dan semasa mekanisme pembaikan DNA dan dalam vitro pengklonan kloning untuk menyertai gen yang dikehendaki minat kepada genom vektor. Terdapat dua ligase DNA utama yang digunakan pada masa ini oleh ahli biologi molekul: ligase T4 dan T7 DNA. T4 DNA ligase adalah salah satu daripada enzim pertama yang dapat diasingkan daripada bakteriofag T4. T7 DNA ligase, yang merupakan protein yang lebih kecil, adalah enzim yang diasingkan daripada bakteriofag T7. Ini adalah perbezaan utama antara ligase DNA T4 dan T7.
KANDUNGAN
1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama
2. Apakah Tindakan DNA Ligase
3. Apakah T4 DNA Ligase
4. Apakah T7 DNA Ligase
4. Kesamaan Antara T4 dan T7 DNA Ligase
5. Side by Side Perbandingan - T4 vs T7 DNA Ligase dalam Borang Tabular
6. Ringkasan
Apakah Tindakan DNA Ligase??
Ligation DNA berlaku dalam reaksi tiga langkah. Langkah pertama adalah serangan nukleofilik pada alpha-fosfor ATP yang menghasilkan enzim enzim-adenylate perantaraan kovalen di mana AMP dikaitkan dengan nitrogen rantaian sisi terminal lisin. Dalam langkah kedua, serangan nukleofilik berlaku pada fosfor enzim-adenylate oleh substrat DNA yang ditamatkan 5'-fosfat, melepaskan lisin dan membentuk DNA-adenylate. Dalam langkah terakhir, DNA-adenylate diserang oleh 3'- OH sejenis DNA lain, melepaskan AMP dan bergabung dengan polynucleotides.
Apakah T4 DNA Ligase??
T4 Ligase adalah ligase pertama yang akan diasingkan dan dikenal pasti oleh Meselson, Weigle, dan Kellenberger dan merupakan lase komersial pertama yang dihasilkan. T4 DNA ligase adalah enzim bergantung ATP yang memangkinkan pembentukan ikatan fosfodiester. Ia adalah rantai polipeptida tunggal dengan 487 asid residu amino dan mempunyai berat molekul kira-kira 77 kDa. PH optimum untuk aktivitinya terletak pada julat 7.5 - 8.
Rajah 01: T4 DNA Ligase
T4 DNA Ligase, seperti namanya, terdapat dalam bakteriofag T4 dan terpencil apabila phage menghasilkan enzim selepas jangkitan -E coli. Enzim ligates double duplex DNA terkandas dengan hujung tumpul dan serpihan yang terikat harus berdekatan satu sama lain.
Apakah T7 DNA Ligase??
T7 ligase adalah protein 41 kDa yang dihasilkan oleh Bacteriophage T7 dan diasingkan dengan menjangkiti E coli sel. Fungsi utama ligase T7 adalah untuk melambaikan dupleks DNA melalui hubungan fosfodiester dan bergabung dengan serpihan DNA yang berdekatan semasa eksperimen pengklonan. PH optimum untuk ligase T7 DNA terletak pada julat 7.0 - 7.2. T7 ligase bergantung kepada ATP. Ligagens T7 DNA juga mampu menyebarkan hibrid DNA dan RNA, menimbulkan konformasi yang tidak normal semasa transkripsi; Walau bagaimanapun, fenomena ini masih dalam kajian oleh dalam vitro kajian.
Apakah Kesamaan Antara T4 dan T7 DNA Ligase?
- T4 dan T7 DNA Ligase mengambil bahagian dalam tindak balas ligation dengan penyepuhlindapan dupleks DNA melalui pembentukan ikatan fosfodiester antara akhir 3 'OH dan akhir fosfat 5' fragmen DNA.
- Kedua-dua enzim ini menghalang dupleks DNA tumpul yang berakhir dengan satu sama lain.
- Kedua-dua enzim adalah bergantung kepada ATP.
- Enzim-enzim ini diasingkan dengan menjangkiti E coli sel dengan bakteria tertentu.
- Aplikasi kedua-dua enzim termasuk:
- Pengklonan molekul - untuk mengikat gen yang menarik ke vektor
- Pembaikan DNA - untuk membaiki relung dua terkandas
- Replikasi DNA dalam vitro
- Tindak balas rantai ligase
Apakah Perbezaan Antara Ligase DNA T4 dan T7?
T4 vs T7 DNA Ligase | |
| T4 DNA Ligase jenis ligase DNA yang diasingkan daripada bakteria T4 dan terlibat dalam membubarkan serpihan DNA bersebelahan melalui pembentukan ikatan fosfodiester. | T7 DNA Ligase jenis ligase DNA yang diasingkan daripada bakteriofag T7 dan terlibat dalam membubarkan serpihan DNA bersebelahan melalui pembentukan ikatan fosfodiester. |
| Saiz Protein | |
| Saiz ligase T4 DNA adalah 77 kDa - lebih besar berbanding ligase T7 DNA. | Saiz ligase DNA T7 ialah 41 kDa. |
| PH optimum | |
| Pelbagai pH yang berfungsi ligase T4 DNA adalah 7.5 - 8.0. | Julat pH yang berfungsi ligase T7 DNA adalah 7.0 - 7.2. |
Ringkasan - T4 vs T7 DNA Ligase
Ligase DNA adalah kelas enzim penting yang terlibat dalam pengklonan molekul untuk menghasilkan molekul DNA rekombinan yang mengandungi gen yang menarik. Reaksi ligasi adalah tenaga menggunakan tindak balas dan terdapat kajian penyelidikan baru dijalankan untuk meningkatkan ketepatan melalui modulasi ligase yang tersedia. Ligase T4 dan T7 DNA adalah dua jenis enzim ligase DNA penting yang digunakan dalam teknik biologi molekul. T7 DNA ligase juga merupakan hasil penyelidikan yang berdasarkan ligase utama yang terasing dari terinfeksi T4 E coli. T7 digambarkan lebih banyak kecekapan dan ketepatan dalam menjalankan fungsinya kerana saiz yang lebih kecil. Ini adalah perbezaan antara ligase T4 dan T7.
Muat turun Versi PDF T4 vs T7 DNA Ligase
Anda boleh memuat turun versi PDF artikel ini dan menggunakannya untuk tujuan luar talian seperti nota kutipan. Sila muat turun versi PDF di sini Perbezaan antara Ligase T4 dan T7.
Rujukan:
1. "DNA Ligase, T4." DNA Ligase, T4 - Manual Enzim Worthington, Boleh didapati di sini. Diakses pada 22 Ogos 2017.
2. Doherty, Aidan J., et al. "Bacteriophage T7 DNA Ligase OVEREXPRESSION, PURIFICATION, CRYSTALLIZATION, DAN CHARACTERIZATION." Jurnal Kimia Biologi, 10 Mei 1996, terdapat di sini. Diakses pada 22 Ogos 2017.
Image Courtesy:
1. "Rajah 3. Sokongan Splint Single Stranded mRNA-DNA T4 DNA Ligase Ligation." (CC BY 3.0) melalui Wikimedia Commons
