Perbezaan antara Trypsinization Hangat dan Sejuk
Share
Perbezaan Utama - Warm vs Dingin Trypsinization
Trypsinization panas dan sejuk adalah dua kaedah yang digunakan dalam pengasingan sel-sel enzim dalam kultur sel haiwan. The perbezaan utama antara trypsinization panas dan sejuk, seperti yang dicadangkan oleh nama-nama, bergantung kepada suhu di mana trypsin ditambah untuk pengasingan sel. Trypsinization panas berlaku di bawah keadaan suhu yang lebih tinggi (36.5 - 37 0C) manakala trypsinization sejuk berlaku di bawah keadaan suhu rendah.
Semasa proses pembiakan sel primer sel haiwan, terdapat tiga kaedah utama yang digunakan dan telah terbukti berjaya. Tiga kaedah ini termasuk pengasingan sel-sel mekanikal, pengasingan sel-sel enzim dan teknik penonjolan utama. Pengasingan sel-sel enzim yang membawa kepada pengasingan sel-sel dan ia dilakukan oleh enzim trypsin enzim protein. Oleh itu, proses ini dikenali sebagai Trypsinization. Trypsinization boleh dilakukan di bawah dua keadaan yang berbeza iaitu Warm Trypsinization dan Cold Trypsinization. Trypsinization hangat adalah kaedah merawat sel dengan trypsin dalam keadaan hangat pada suhu 36.5 - 37 0C. tripleinisasi sejuk adalah proses rawatan trypsin yang berlaku di bawah keadaan sejuk lebih baik dalam ais mengekalkan suhu yang sangat rendah.
KANDUNGAN
1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama
2. Apa itu Trypsinization Hangat
3. Apa itu Trypsinization Dingin
4. Persamaan Antara Trypsinization Hangat dan Sejuk
5. Side by Side Comparison - Warm vs Cold Trypsinization dalam Formula Tabular
6. Ringkasan
Apa itu Trypsinization Panas?
Trypsinization boleh dilakukan untuk memisahkan komponen selular untuk mengasingkan sel-sel untuk menghasilkan budaya sel primer. Trypsin adalah enzim degradasi protein, dan campuran enzim yang digunakan dalam trypsinization boleh menjadi ekstrak mentah atau produk yang disucikan. Ekstrak mentah dikatakan lebih berkesan dalam lisis protein dan disintegrasi sel kerana ia mengandungi enzim degradasi lain.
Trypsinization hangat ialah kaedah enzimatik yang paling biasa digunakan untuk pengasingan sel yang berlaku di bawah keadaan suhu yang lebih tinggi. Sebelum rawatan dengan trypsinization, tisu yang dikehendaki dicincang menjadi kepingan yang lebih kecil. Ia memudahkan proses pengasingan yang mudah. Tisu cincang itu kemudian dibasuh dalam media khas yang dikenali sebagai medium Saluran Basis Penyisihan.
Selepas selesai langkah pembasuhan, sel-sel tersebut akan berubah menjadi satu botol yang mengandungi enzim aktif, iaitu trypsin. Oleh kerana teknik ini menunjukkan protokol trypsinization yang hangat, trypsin diletakkan pada suhu sekitar 37 0C selama kira-kira empat jam.
Rajah 01: Trypsin
Kandungannya bercampur-campur dan bergetar dengan menggunakan kaedah sentrifugasi untuk kemudahan protokol dan untuk mempercepat proses pengasingan. Sebaik sahaja masa yang disyorkan dicapai, sel-sel boleh diperoleh dari supernatan. Sel-sel yang berasal dari supernatan kemudian diinkubasi pada suhu dan masa tertentu.
Apa itu Trypsinization Sejuk?
Trypsinization sejuk adalah jenis trypsinization lain yang berlaku di bawah keadaan sejuk. Dalam teknik ini, sel-sel yang dicincang dan dibasuh diletakkan di dalam botol pada ais dan kemudian direndam dengan trypsin. Tempoh rendaman adalah lebih lama - kira-kira 6 - 24 jam.
Selepas selesai prosedur perendaman, trypsin dikeluarkan dari lysate sel, dan kepingan-kepingan tisu lebih diinkubasi pada 37 0C selama 20 - 30 minit. Pengasingan sel-sel telah diakibatkan oleh berulang-ulang pipetting campuran tisu. Ini akan membolehkan sel-sel untuk memisahkan dari membran dan datang ke supernatan. Setelah sel berada dalam supernatan, mereka diinkubasi dan ditanam pada suhu dan tempoh yang dikehendaki.
Kaedah trypsinization sejuk mempunyai beberapa kelebihan
- Hasil yang lebih tinggi dari sel yang berdaya maju kerana kerosakan sel diminimumkan. Kerosakan sel diminimumkan dengan tidak menggunakan langkah sentrifugasi.
- Kaedah yang sangat mudah.
- Kurang susah payah.
Batasan utama kaedah trypsinization sejuk adalah bahawa kuantiti yang banyak tidak dapat digunakan dalam satu keadaan.
Apakah Kesamaan Antara Pemanasan Hangat dan Dingin??
- Kedua-dua proses Trypsinization Hangat dan Sejuk menggunakan enzim trypsin untuk pengasingan sel.
- Kedua-dua proses Trypsinization Hangat dan Sejuk digunakan dalam prosedur kultur sel untuk pengasingan sel.
- Dalam kedua-dua prosedur rawatan Trypsinization Hangat dan Sejuk, sel berasal dari supernatan.
Apakah Perbezaan Antara Trypsinization Hangat dan Dingin??
Warm vs Cold Trypsinization | |
| Trypsinization hangat adalah kaedah merawat sel dengan trypsin dalam keadaan hangat pada suhu 36.5 - 37 0. | Trypsinization sejuk adalah proses rawatan trypsin yang berlaku di bawah keadaan sejuk lebih baik dalam ais mengekalkan suhu yang sangat rendah. |
| Protokol | |
| Potongan tisu cincang dikekalkan pada 37 0C secara berterusan sepanjang prosedur. | Potongan tisu yang dicincang pada mulanya dikekalkan pada suhu es dingin dan kemudian dikekalkan pada 37 0. |
| Suhu | |
| Trypsinization panas berlaku pada 36.5 - 37 0 | Trypsinization sejuk berlaku pada suhu ais sejuk. |
| Masa Dikonsumsi | |
| Masa yang lebih sedikit diperlukan untuk keseluruhan proses (sekitar 4 jam) trypsinization hangat. | Masa yang diperlukan lebih lama (sekitar 6 - 24 jam) untuk trypsinization sejuk. |
| Hasil Sel yang Berpeluang | |
| Rendah dalam trypsinization panas. | Tinggi dalam trypsinization sejuk. |
| Penggunaan Centrifugation | |
| Centrifugation diperlukan untuk pengasingan sel dalam trypsinization yang panas. | Centrifugation tidak diperlukan dalam trypsinization sejuk. |
| Kuantiti Tisu Permulaan untuk Trypsinization | |
| Kuantiti tisu yang lebih besar boleh digunakan dalam trypsinization hangat. | Kuantiti tisu yang lebih kecil boleh digunakan dalam trypsinization sejuk. |
| Kerosakan Sel | |
| Tinggi kerana sentrifugasi dalam trypsinization panas. | Kurang disebabkan oleh trypsinization sejuk. |
Ringkasan - Panas vs Dingin Trypsinization
Trypsinization adalah kaedah menggunakan enzim trypsin enzim protein untuk pengasingan dan penyediaan kultur sel primer semasa proses kultur sel. Terdapat dua teknik utama trypsinization berdasarkan suhu yang digunakan semasa prosedur. Mereka adalah trypsinization panas dan sejuk. Trypsinization hangat dilakukan pada 37 0C manakala trypsinization sejuk dijalankan di bawah keadaan sejuk. Walaupun trypsinization sejuk mengambil masa yang lebih lama untuk disiapkan, dikatakan mempunyai hasil sel yang lebih tinggi. Ini adalah kerana kerosakan sel diminimumkan dalam trypsinization sejuk kerana ia tidak menggunakan langkah sentrifugasi yang kuat. Ini adalah perbezaan antara trypsinization panas dan sejuk.
Rujukan:
1. "Trypsinization." Trypsinization - Gambaran Keseluruhan | Topik SainsDirect. Terdapat di sini
2. "Budaya Sel Primer: 3 Teknik (Dengan Diagram)." Perbincangan Biologi, 16 Okt 2015. Boleh didapati di sini
Image Courtesy:
1.'Trypsin site active'By Fdardel - Kerja sendiri, (CC BY-SA 3.0) melalui Wikimedia Commons
