Perbezaan Antara PCR dan PCR Masa Nyata

PCR vs PCR Real-time

Tindak balas rantai PCR atau Polimerase adalah penemuan yang merevolusi dalam biologi molekul moden, yang pertama kali dikembangkan oleh ahli kimia Kary Mullis pada tahun 1983. Ia membolehkan urutan tunggal dalam DNA kompleks untuk diperkuat untuk dianalisis. Idea asas PCR adalah bahawa dua primer, yang merupakan pelengkap kepada helai yang berlawanan dari urutan DNA, berorientasikan ke arah satu sama lain; Primer menghasilkan helai pelengkap, masing-masing mengandungi primer lain. Oleh itu, hasilnya adalah kuantiti besar urutan yang bersamaan dengan DNA yang terletak di antara kedua-dua primer. Enzim polimerase DNA digunakan untuk memperluaskan primer dalam PCR. Polimerase DNA adalah enzim termostable, dan ia mempunyai keupayaan untuk bertahan dalam suhu tinggi (94 hingga 95 ° C) yang digunakan untuk DNA denaturasi template.

PCR melibatkan tiga langkah, iaitu, pusingan berulang denaturation, annealing primers, dan sintesis DNA. Mesin termokycler digunakan untuk melakukan tindak balas ini supaya ia boleh diprogramkan untuk menukar suhu dengan cepat dan tepat. Aplikasi PCR adalah penyiasatan jenayah, cap jari DNA, pengesanan patogen, dan analisis DNA spesies manusia awal.

Apakah PCR konvensional??

Terdapat tiga peringkat utama PCR konvensional, iaitu; Peringkat penguatan DNA, pemisahan PCR, dan pengesanan produk. Pemisahan segmen DNA biasanya dilakukan oleh elektroforesis gel agarosa. Produk-produk tersebut kemudian diwarnai dengan etheiduim bromida. Akhirnya, pengesanan dicapai dengan visualisasi band ke gel di bawah cahaya UV. Oleh itu, keputusan akhir PCR konvensional tidak dinyatakan sebagai nombor. Biasanya PCR konvensional hanya dapat mengesan satu parameter.

Apakah PCR Masa Nyata??

PCR masa nyata dapat mengesan penguatan produk, sebagai produk disintesis. Dengan perkembangan teknologi, PCR telah menjadi teknik yang sangat popular, terutamanya untuk pengesanan dan pengenalan bakteria dalam makanan. PCR masa nyata menggunakan sistem dye berpilin dan thermocycler yang dilengkapi dengan keupayaan pengesan pendarfluor.

Apakah perbezaan antara PCR konvensional dan PCR masa nyata??

• PCR konvensional lebih banyak memakan masa kerana menggunakan elektroforesis gel untuk menganalisis produk PCR yang diperkuatkan. Sebaliknya, PCR masa nyata kurang memakan masa kerana ia dapat mengesan amplifikasi semasa fasa awal tindak balas.

• PCR masa nyata mengumpul data pada fasa pertumbuhan eksponen PCR sementara PCR tradisional mengumpul data pada Titik akhir reaksi.

• Keputusan titik akhir PCR konvensional mungkin tidak terlalu tepat, tetapi keputusan PCR masa nyata sangat tepat.

• PCR masa nyata lebih sensitif daripada PCR konvensional.

• PCR konvensional mempunyai resolusi yang sangat lemah manakala PCR masa nyata dapat mengesan perubahan yang sangat kecil akibat resolusi tinggi.

• Pengesanan titik akhir PCR konvensional mempunyai jarak dinamik yang singkat sementara pengesanan PCR masa nyata mempunyai pelbagai dinamik.

• Tidak seperti PCR konvensional, teknik pengesanan automatik dijumpai dalam PCR masa nyata.

• PCR konvensional adalah sangat canggih dan tenaga kerja lebih intensif daripada PCR masa nyata.

• Tidak seperti PCR masa nyata, PCR konvensional tidak boleh mendiskriminasikan bakteria mati dan hidup.

• PCR masa nyata menggunakan sistem pendarfluor pendarfluor untuk mengesan produk sementara PCR konvensional menggunakan etida bromida dan cahaya UV untuk menggambarkan band dalam medium gel agarose.