Perbezaan Antara Primer Primer dan Primer Sequencing
Share
Perbezaan Utama - PCR Primers vs Urutan Primer
Dengan perkembangan baru dalam bidang biologi molekular, teknik genetik yang berbeza telah dibangunkan yang menjadikan proses penyiasatan pelbagai saluran subjek mudah dan tepat. PCR dan prosedur penjujukan lain adalah dua teknik penting seperti itu. Mereka menggunakan subkomponen yang berbeza. Primer dianggap sebagai sub-komponen utama biasa untuk kedua-dua teknik PCR dan Sequencing. Primer PCR digunakan untuk penguatan urutan DNA tertentu sementara ssetara dengan primer digunakan dalam konteks penjujukan fragmen DNA dengan niat untuk mendedahkan urutan khusus urutan nukleotida. Ini adalah perbezaan utama antara PCR primer dan penjujukan primer.
KANDUNGAN
1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama
2. Apakah PCR Primer
3. Apakah Primer Sequencing
4. Kesamaan Antara Primer Primer dan Primer Sequencing
5. Perbandingan Side by Side - PCR Primers vs Primers Sequencing dalam Borang Tabular
6. Ringkasan
Apakah PCR Primer??
Reaksi Rantaian Polimerase (PCR) adalah teknik genetik yang digunakan dalam bidang biologi molekular untuk menguatkan satu atau beberapa salinan segmen DNA tertentu dan memperoleh banyak jutaan salinan serupa. Dalam tindak balas PCR, komponen yang berbeza digunakan termasuk primer. Primer adalah helai DNA pendek dengan panjang nukleotida 18-25 menjadikannya serasi dengan permulaan dan rantau akhir serpihan DNA untuk dikuatkan. Primer boleh menjadi primer dan pembalikan primer. Primer ini mengikat fragmen DNA pada titik-titik tertentu di mana ia membuat polimerase DNA untuk mengikat dengan primer tertentu di lokasi dan memulakan sintesis strand DNA baru.
Pemilihan primer merupakan aspek penting dalam proses PCR. Pemilihan panjang buku primer adalah penting. Panjang ideal ialah 18-25 nukleotida. Sekiranya panjang terlalu pendek atau terlalu lama, primer tidak akan mengikat urutan DNA untuk dikuatkan dengan tepat. Primer yang terlalu pendek panjang membawa kepada penyepuhlindapan primer yang tidak spesifik di lokasi yang berlainan dalam urutan DNA.
Rajah 01: Primer PCR
Kandungan Guanine dan Cytosine (GC) dalam buku asas yang baik harus berada dalam lingkungan 40-60. Suhu penindasan primer dan suhu lebur adalah faktor penting semasa PCR. Suhu lebur harus dikira dengan tepat, dan suhu penyepuhlahan primer sepatutnya 5 0C kurang daripada suhu lebur. Suhu lebur hendaklah 60 ° C dan 75 ° C. Suhu yang terlalu tinggi atau terlalu rendah akan menyebabkan aktiviti polimerase DNA kurang aktif.
Apakah Primer Sequencing??
Primer urutan digunakan dalam konteks penjujukan fragmen DNA dengan niat untuk mendedahkan identiti khususnya. Untuk mendapatkan hasil penjujukan yang baik hasil primer dan template berkualiti tinggi adalah penting. Oleh itu, apabila primer dipilih, mereka harus unik ke rantau tertentu di mana kita ingin urutan. Ia juga perlu dengan orientasi yang betul di mana urutan biasanya dihasilkan dari 3 'hingga 5' hujung primer. Urutan itu tidak memerlukan hibridisasi diri yang tidak diingini seperti pembentukan gelung rambut. Ia tidak sepatutnya mengandungi asas Guanine yang berturut-turut.
Suhu lebur (Tm) primer harus sesuai untuk syarat-syarat urutan. Oleh itu, ia mestilah terletak di antara 52oC dan 74oC. Penyediaan oligonukleotida untuk digunakan sebagai primer perlu disucikan untuk mendapatkan panjang penuh urutan urutan yang dikehendaki. Jika oligonukleotida mengandungi kekotoran, isyarat urutan primer akan disempitkan dari laman web peletusan yang berbeza, dan ia juga akan mengurangkan bilangan sel asas.
Rajah 02: Primer urutan
Suhu lebur primer (Tm) daripada oligonukleotide menentukan, betapa kuatnya helai DNA pelengkap yang hibridisasi antara satu sama lain. Tm boleh dianggap sebagai pengiraan termodinamik di mana ia bergantung kepada kedua-dua urutan DNA dan beberapa keadaan seperti kepekatan garam. Tm adalah penting semasa PCR di mana varian yang disebut penjujukan kitaran digunakan untuk menghasilkan sekumpulan serpihan dideoxynucleotide yang ditamatkan. Di sini, primer yang disusun pada mulanya akan disebarkan secara alternatif, kemudian diperluas dan terakhir dinamakan untuk penguatan. Oleh itu, nilai Tm hendaklah di antara 52oC dan 74o C. Synigonized oligonucleotides boleh diperolehi daripada makmal sintesis DNA / RNA sebagai satu pilihan. Skala kecil sintesis yang digunakan untuk penjujukan DNA biasanya 50 nmol. Juga yang paling penting ialah primers yang digunakan untuk penjujukan perlu dibersihkan untuk bebas daripada kekotoran yang akan menghalang pengurangan kualiti.
Apakah Kesamaan Antara Primer Primer dan Primer Sequencing?
- Kedua-dua Primer Primer dan Primer Sequencing adalah primer yang digunakan dalam proses penguatan urutan DNA yang disasarkan.
- Kedua-dua Primer Primer dan Primer Sequencing terdiri daripada nukleotida.
- Kedua-dua Primer Primer dan Primer Sequencing adalah oligomer pendek.
Apakah Perbezaan Antara Primer Primer dan Primer Sequencing?
PCR Primers vs Primers Sequencing | |
| Primer PCR adalah helai DNA pendek dengan panjang urutan nukleotida 18-25 menjadikannya serasi dengan permulaan dan rantau akhir serpihan DNA yang akan diperkuat. | Primer urutan adalah oligomer pendek yang digunakan dalam konteks penjujukan fragmen DNA dengan niat untuk mendedahkan identiti tertentu. |
| Fungsi | |
| Primer PCR digunakan untuk penguatan urutan DNA tertentu. | Primer urutan digunakan dalam konteks penjujukan fragmen DNA dengan niat untuk mendedahkan identiti khususnya. |
| Bilangan primer diperlukan | |
| Dua primer; satu buku primer dan satu buku terbalik digunakan sebagai primer PCR. | Hanya memerlukan satu buku primer sebagai urutan asas. |
Ringkasan - PCR Primers vs Urutan Primer
Primer urutan digunakan dalam konteks penjujukan fragmen DNA dengan niat untuk mendedahkan identiti khususnya. Satu buku primer penjujukan akan cukup untuk menjalankan proses tersebut. Untuk mendapatkan keputusan penjujukan yang baik, primer dan template berkualiti tinggi adalah penting. Oleh itu, apabila primer dipilih, mereka harus unik ke rantau tertentu di mana kita ingin urutan. Primer PCR adalah helai DNA pendek dengan panjang nukleotida 18-25 yang serasi dengan permulaan dan rantau akhir serpihan DNA yang akan dikuatkan. Primer PCR boleh menjadi primer dan primer utama. Kandungan Guanine dan Cytosine (GC) dalam buku asas yang baik harus berada dalam lingkungan 40-60. Suhu penindasan primer dan suhu lebur adalah aspek penting semasa PCR. Ini adalah perbezaan antara primer PCR dan Primer urutan.
Rujukan:
1. "tindak balas rantai polimerase (PCR)." Khan Academy. Terdapat di sini
2. "Primer urutan dan reka bentuk primer." Primer urutan dan reka bentuk primer | Perkhidmatan DNA Teras Universiti | Universiti Calgary. Terdapat di sini
Image Courtesy:
1.'Primers RevComp'By Zephyris - Kerja sendiri, (CC BY-SA 3.0) melalui Wikimedia Commons
2.'DNA Sequencin 3 kaedah pelabelan 'Dengan Abizar (pengunggah asal) di Wikipedia Bahasa Inggeris - Dipindah oleh Gustavocarra., (Public Domain) melalui Wikimedia Commons
